Obtención y caracterización de una proteína recombinante de la cápside del parvovirus porcino 5 (ppv5) unida a la proteína hsp90.3 de Nicotiana benthamiana como carrier
DOI:
https://doi.org/10.14482/sun.01.512.218Palabras clave:
parvovirus porcino, cápside, carrier, proteínas recombinantes, western blot, detección.Resumen
Introducción: El crecimiento del sector porcícola a nivel mundial se ha visto impactado por los elevados índices de mutación de los virus que ocasionan trastornos reproductivos y respiratorios. Uno de los más representativos es el parvovirus porcino (PPV1 hasta PPV8); su alta tasa de mutación afecta los esquemas de diagnóstico y vacunación, ocasionando un 8 % de mortalidad a nivel mundial y grandes pérdidas económicas para el sector. El PPV5 ha sido poco estudiado y se encuentra relacionado a coinfecciones con otros patógenos, como circovirus porcino (PCV2) y virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV). Por ello, surge la necesidad de desarrollar bioproductos seguros, a bajo costo y específicos frente a las variantes que puedan generarse por los mecanismos de evolución de los agentes infecciosos.
Métodos: Este estudio buscó producir la proteína recombinante de la cápside del PPV5 sola o fusionada a la proteína Hsp90.3 de Nicotiana benthamiana como carrier. Para ello, se amplificó por PCR convencional el gen de la proteína de la cápside con tamaño de 1695 pb. Posteriormente, se clonó en el vector pGEM-T, y se subclonó en el vector de expresión pRSET-A solo y fusionado. Luego, se transformó en células competentes de expresión E. coli (BL21 - Rosetta) y se estandarizaron lo niveles de expresión de las proteínas recombinantes, las cuales fueron purificadas mediante cromatografía de afinidad (IMAC) e identificadas con anticuerpos monoclonales (Anti6XHis). Adicionalmente, se realizó un Western blot para identificar la reactividad de las proteínas recombinantes producidas frente a sueros de cerdos seropositivos para PPV5.
Resultados: Los resultados de este proyecto representan un avance en el desarrollo de esquemas de detección, control y prevención más efectivos contra el PPV5.
Conclusiones: También se evaluará la expresión de estas proteínas en sistemas vegetales, buscando establecer una plataforma biotecnológica novedosa para la producción de proteínas recombinantes con potencial farmacéutico.
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