Caracterización de la actividad alergénica y enzimática de extractos somáticos producidos a partir de cultivos in vitro del ácaro Dermatophagoide farinae
Abstract
Resumen
Introducción: Dermatophagoides farinae (DF) es un ácaro cosmopolita presente en el polvo intradomiciliario. Este ácaro es fuente importante de aéreo-alérgenos desencadenantes de asma y rinitis alérgica.
Objetivo: El propósito del presente trabajo fue la producción y caracterización de extractos alergénicos para uso en diagnóstico alergológico y terapia.
Métodos: Los extractos se prepararon a partir de cultivos puros In vitro de ácaros. Las proteínas del ácaro fueron extraídas mediante lisis osmótica. La concentración
de proteínas se determinó por microensayo de Bradford y el perfil electroforético fue identificado por SDS-PAGE. La actividad enzimática fue evaluada con el estuche comercial Api Zym (Biomeriux ®) y la actividad alergénica por inmunoensayo de Dot Blot.
Resultados: Se prepararon cinco lotes de extractos. La media del peso seco de material extraído fue 37,04 mg/gramo de ácaros ( DE= 11,3) y la media de la cantidad de proteína fue 212,4 g/mg de peso seco (DE= 33,3). El perfil SDS-PAGE mostró la presencia de 8 bandas comunes (21-109 kDa). Todos los extractos presentaron actividad enzimática hidrolasa. También se demostró actividad tripsina, alfa-amilasa y alfa-quimiotripsina, correspondientes a los alérgenos de los ácaros del grupo 3, 4 y 6 respectivamente. Todos los extractos tuvieron proteínas con capacidad de unión a los anticuerpos IgE.
Conclusión: Aquí presentamos la producción de extractos del ácaro DF, con actividad alergenica. Estos resultados fundamentaran la producción a escala de extractos alergenicos de ácaros desencadenates de enfermedades alérgicas en el humano, con fines diagnósticos y de aplicación terapéutica.
Palabras clave: Ácaros, extractos, alérgenos, actividad enzimática.
Abstract
Introduction: Dermatophagoides farinae (DF) is a cosmopolitan mite present in the indoor house dust. This mite is an important source of aeroallergens triggering of allergic asthma and rhinitis.
Objective: The purpose of the present study was the production and characterization of allergenic extracts for use in allergologic diagnosis and therapy.
Methodology: Extracts were prepared from pure In vitro culture of the mite. Mite proteins were extracted by osmotic lysis. Proteins concentration was measured by Bradford microassay test and the electrophoretic profile was identified by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).
The enzymatic activity was evaluated with the commercial Kit, Api Zym (Biomeriux ®) and a Dot blot immunoassay was done in order to evaluate allergenic activity of the extracts.
Results: Five lots of extracts were prepared. The average of dry weight material extract was 37.04 mg/g of mites (SD= 11.3) and the average of total protein obtained was 212.4 g/mg of dry weight (SD= 33.3). The SDS-PAGE profile showed 8 common bands (21-109 kDa).
All extracts presented enzymatic hydrolase activity.
Furthermore, enzymatic activity for trypsin, alpha-amylase and alpha- chymotrypsin, corresponding to the mites allergen groups 3, 4 and 6, respectively, was demonstrated. All extracts have IgE antibody binding proteins.
Conclusions: We report the production of somatic extracts DF, with allergenic activity. These results would be base for the scale production of allergenic extracts of mites responsible for the induction of human allergic diseases, useful for diagnostic and therapeutic applications.
Key words: Mites, extracts, allergens, enzymatic activity.
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